OSAS模式间歇低氧大鼠PMN凋亡及与血管内皮细胞交互影响机制的研究

【摘要】OSAS是一种以慢性间歇低氧(CIH)为核心病理生理学基础伴发心、脑血管等多系统损伤的慢性疾病。CIH可以诱发一系列炎症-氧化应激反应和机体细胞凋亡周期的改变,影响细胞功能及与周边细胞间的相互作用,导致器官损伤及功能异常。血管内皮损伤是OSAS相关血管性疾病如高血压、冠心病、脑卒中等的基本病理损伤基础。外周血细胞是和血管内皮细胞接触及相互作用最主要的体液成分。PMN是重要的炎症细胞,其生存周期、功能状态及与血管内皮细胞的交互作用直接影响血管内皮的功能。本研究从不同间歇低氧暴露时间对PMN凋亡及其以不同方式与血管内皮细胞相互作用对细胞间粘附和内皮凋亡的影响和抗氧化剂Tempol干预的角度进一步探讨OSAS相关血管性并发症的病理生理机制,从另一视角为OSAS的临床诊疗提供新的策略和试验依据。内容1.研究不同间歇低氧暴露时间对大鼠PMN凋亡的影响2.研究间歇低氧大鼠PMN与血管内皮细胞在直接共培养与transwell间接共培养相互作用下,对细胞间粘附指标ICAM-1、E-选择素浓度及内皮细胞凋亡指标bcl-2/bax、caspase-3的影响及抗氧化剂Tempol的干预效果方法第一部分：48只成年雄性Wistar大鼠随机分为常氧(NIH)和间歇低氧(IH)4周组、6周组、8周组,每组8只；暴露结束,腹主动脉取血,双层Ficoll-Histopaque双密度梯度离心法分离PMN。流式细胞技术Annexin-V和7-AAD双标法检测PMN凋亡率。第二部分：32只大鼠随机分为NIH组、IH组、间歇低氧生理盐水干预组(IHN组)、间歇低氧Tempol干预组(IHT组),暴露6周后腹主动脉取血分离PMN,分别与大鼠主动脉内皮细胞行直接共培养和transwell间接共培养4小时,ELISA法测定上清液ICAM-1和E-选择素浓度；内皮细胞分为：与NIH组PMN直接共培养内皮(NIHE)组和间接共培养内皮(T-NIHE)组,与IH组PMN直接共培养内皮(IHE)组和间接共培养内皮(T-IHE)组,与IHN组PMN直接共培养内皮(IHNE)组和间接共培养内皮(T-IHNE)组和与IHT组PMN直接共培养内皮(NIHE)组和间接共培养内皮(T-NIHE)组,免疫印记(Westernblot)法测定内皮细胞bcl-2、bax、caspase-3表达。结果第一部分：1.IH组大鼠PMN凋亡率低于NIH组：4周NIH组vsIH组(22.35±2.26vs16.23±3.00；P<0.05)；6周NIH组vsIH组(23.56±1.26vs16.71±1.97;P<0.05)；8周NIH组vsIH(25.48±1.93vs20.16±1.11;P<0.05)。2.随着IH时间的延长,PMN凋亡率有上升趋势：NIH组4周、6周、8周组间存在差异(F=4.297,P=0.033),8周组高于4周组(P=0.011),IH组4周、6周、8周组间存在差异(F=5.845,P=0.013),8周组高于4周组(P=0.007)和6周组(P=0.015)。第二部分：1.大鼠PMN与大鼠主动脉内皮细胞直接共培养对细胞间粘附和内皮细胞凋亡的影响1)直接共培养上清液ICAM-1浓度升高,IHE组、IHNE组(P<0.001)和IHTE组(P=0.023)高于NIHE组；E-选择素浓度升高,IHE组、IHNE组(P<0.001)高于NIHE组,IHTE组低于IHE组(P<0.001)和IHNE组,与NIHE组无差别(P=0.557)2)直接共培养内皮细胞Bcl-2表达增加,IHE组、IHNE组(p<0.001)和IHTE组(P=0.029)高于NIHE组；Bax表达增高,IHE组、IHNE组(P<0.001)高于NIHE组;Bcl-2/Bax比值降低,IHE组、IHNE组(P<0.001)和IHTE组(P=0.014)低于NIHE组；Caspase-3表达升高,IHE组、IHNE组(P<0.001)高于NIHE组,2.大鼠PMN与大鼠主动脉内皮细胞transwell间接共培养对细胞间粘附和内皮细胞凋亡的影响1)transwell下室上清液ICAM-1、E选择素浓度升高,T-IHE组、T-IHNE组高于T-NIHE组(P<0.001),T-IHTE组低于T-IHE组和T-IHNE组(P<0.05),与T-NIHE组无差别(P>0.05)2)间接共培养内皮细胞Bcl-2表达增加,T-IHE组(P=0.001)和T-IHNE组(P<0.0001)高于T-NIHE组,T-IHTE组与T-NIHE组无差别(P=0.649)；Bax表达增加,T-IHE组、T-IHNE组(P<0.0001)和T-IHTE组(P=0.009)高于T-NIHE组；Bcl-2/Bax比值降低,T-IHE组、T-IHNE组(P<0.0001)和T-IHTE组(P=0.001)低于T-NIHE组；Caspase-3表达增高,T-IHE组、T-IHNE组(P<0.0001)高于T-NIHE组,T-IHTE与T-NIHE组无差别(P=0.602)3.直接共培养组的ICAM-1、E选择素、Bcl-2、Bax、Caspase-3均高于间接共培养组,P均<0.05;Bcl-2/Bax比值低于间接共培养组,P均<0.05结论1.不同间歇低氧暴露时间均会引起PMN凋亡延迟；随着间歇低氧暴露时间的延长,PMN凋亡有增加趋势。2.间歇低氧大鼠PMN与内皮细胞直接共培养与间接共培养均可引起粘附作用增强,直接共培养增强程度重于间接共培养。3.间歇低氧大鼠PMN与内皮细胞直接共培养与间接共培养均促进内皮细胞凋亡,直接共培养重于间接共培养。4.抗氧化剂Tempol可部分改善PMN对内皮细胞的粘附和致凋亡损伤作用；控制粘附作用后效果更加明显。5.抗粘附和抗氧化,克服炎症细胞凋亡延迟、保护内皮细胞等措施是OSAS模式间歇低氧血管相关性并发症防治的重要策略。
【作者】李津娜；
【导师】陈宝元；
【作者基本信息】天津医科大学，内科学（专业学位），2014，博士
【关键词】阻塞性睡眠呼吸暂停综合征；慢性间歇低氧；外周血多形核中性粒细胞；凋亡；抗氧化；

【参考文献】
[1]仇洋.空腔排气对航行体水下发射过程影响的数值模拟研究[D].哈尔滨工业大学,一般力学与力学基础,2013,硕士.
[2]阿布德拉.发展中国与阿尔及利亚经贸合作研究[D].黑龙江大学,国际贸易学,2013,硕士.
[3]李升阳.呼伦贝尔移动网络构建策略与规划方案研究[D].内蒙古大学,工商管理,2012,硕士.
[4]周雪杉.藏药波棱瓜子木脂素类成分系统研究[D].西南交通大学,生药学,2014,硕士.
[5]王国贵.紫外LED光刻光源系统的研究与设计[D].南昌航空大学,精密仪器及机械,2013,硕士.
[6]崔伟.大学生学业自我妨碍与成就目标、心理健康的相关研究[J].科教导刊(上旬刊),2014,11:234-235+237.
[7]钱莹.家蚕Hippo信号通路主要基因的研究[D].苏州大学,生物化学与分子生物学,2014,硕士.
[8]李凌君.PTD4-Apoptin对不同分化程度胃癌细胞系的抑制效应研究[D].华中科技大学,生物化学与分子生物学,2012,硕士.
[9]曹华.策试秀才制度与中古文学[D].中国社会科学院研究生院,中国古代文学,2003,硕士.
[10]万里明.红旗渠精神的时代价值研究[D].内蒙古科技大学,思想政治教育,2013,硕士.
[11]郭松涛.弧传递图与边本原图[D].北京交通大学,2012.
[12]黄威.基于RFID的智能交通系统的设计与实现[D].西安电子科技大学,计算机软件与理论,2012,硕士.
[13]查显弧.一维和二维纳米材料热力学性质的第一性原理研究[D].中国科学技术大学,2014.
[14]贺博.生物油的分级分离和初步改性[D].浙江大学,2007.
[15]闫亮.TPX2在膀胱癌发生发展中的作用及其初步分子机制研究[D].郑州大学,外科学,2014,博士.
[16]尹晓倩.微博用户关系网络结构特征研究[D].中国地质大学（北京）,管理科学与工程,2013,硕士.
[17]马晓波.基于触屏手机双手拇指操作的KLM模型研究[D].浙江理工大学,应用心理学,2013,硕士.
[18]王梦伟.基于局部运动聚类的人群异常行为检测[D].燕山大学,控制工程,2014,硕士.
[19]张丹丹.劳动参与及工资的性别差异[D].中国社会科学院研究生院,人口学,2003,硕士.
[20]王亚萍.蜂针治疗轻中度癌性疼痛的临床观察[D].广州中医药大学,中西医结合临床（专业学位）,2013,硕士.
[21]白华,李春,石高全.pH值响应的氧化石墨烯复合水凝胶[A].中国化学会.中国化学会第27届学术年会第04分会场摘要集[C].中国化学会:,2010:1.
[22]秦莹.基于“三权分立”思想的风景名胜区管理体制创新研究[D].华中科技大学,工程景观学,2013,硕士.
[23]巩华.高炉环行吊车的电机同步控制[D].内蒙古科技大学,控制工程,2014,硕士.
[24]唐伟.石墨烯/聚丙烯酸酯复合材料的优化制备及其性能研究[D].湖北大学,2014.
[25]杨洋.弓网电接触试验台温度测量系统研究[D].西南交通大学,电力系统及其自动化,2013,硕士.
[26]CharlesBenjaminLuhana.Electrocatalytic Properties of Metal Nanoparticles Supported on Carbon Nanostructure Materials[D].东北师范大学,AnalyticalChemistry,2012,硕士.
[27]崔海鹤.我国矿产资源税费制度的生态化改革研究[D].山东师范大学,环境与资源保护法学,2013,硕士.
[28]刘维彬.统一的个人所得税费用扣除标准动态调整机制研究[D].天津财经大学,财政学,2012,硕士.
[29]邹婧.论我国证券投资基金持有人权益保护的完善[D].江西财经大学,经济法学,2013,硕士.
[30]刘文彬.面向服务架构的旋转机械智能诊断维修系统及工程应用研究[D].北京化工大学,机械设计及理论,2008,博士.
[31]翟鹏程.粗集料洛杉矶磨耗虚拟试验方法的研究[D].西南交通大学,建筑与土木工程,2014,硕士.
[32]孙厚朝.基于UG的数字化设计技术的研究[D].中北大学,机械工程,2014,硕士.
[33]朱忠益.小型化高精度数字式微机械加速度计的设计与实现[D].浙江大学,微电子与固体电子学,2013,硕士.
[34]张元涛,石为人,邱明伯.基于非线性干扰观测器的减摇鳍滑模反演控制[J].控制与决策,2010,08:1255-1260.
[35]袁晓征.基于细胞神经网络的逻辑函数设计与实现[D].南京航空航天大学,测试计量技术及仪器,2013,硕士.
[36]彭云.矿井通风系统降阻优化研究[D].湖南科技大学,采矿工程,2013,硕士.
[37]吴锦前.“视音频格式”的转换与分割——视频格式的转换(1)[J].中国传媒科技.2002(09)
[38]赵元清.高功率超宽带脉冲辐射天线的研究[D].哈尔滨工业大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[39]白振霄,宁智,孙春华,付娟.湍流通道中椭球形微粒的受力分析[J].机械工程学报,2015,06:181-188.
[40]涂翼.多倍体水稻幼苗耐盐生理指标的测定及osDH基因表达量研究[D].湖北大学,细胞生物学,2012,硕士.
[41]于兰.陈田鹤艺术歌曲研究[D].山东师范大学,音乐学,2013,硕士.
[42]李军.中国联通CDMA市场营销案例分析[D].西南财经大学,2003.
[43]孙启航.耦合非线性Klein-Gordon-Schrodinger方程的紧致差分方法[D].南京航空航天大学,计算数学,2012,硕士.
[44]张玉芝.离心铸造高速钢复合轧辊的研究[J].热加工工艺,2015,05:103-106.
[45]智建颖.文学与音乐的双重变奏[D].海南大学,文艺学,2014,硕士.
[46]钱琦琦.我国公立医院创新管理模式探析[D].华中科技大学,资产评估,2013,硕士.
[47]张宇晴.Agent在分布环境中的工程应用[D].华北电力大学（河北）,计算机应用技术,2004,硕士.
[48]阿布力克木·阿不来提.基于指数预警方法的地方政府财政风险预警实证研究[D].上海交通大学,行政管理,2013,硕士.
[49]王盛青.长波制冷红外焦平面成像系统盲元检测及补偿研究[D].华中科技大学,通信与信息系统,2013,硕士.
[50]吴崧霖.GIS和RS技术在深圳市龙岗区蚊媒传染病监测中的应用研究[D].广东药学院,流行病与卫生统计学,2012,硕士.